The Triatominae (Hemiptera:Reduviidae) contains the principal and potential Chagas disease vectors present in Mexico, Central America and South America. Triatoma flavida and T. bruneri are Cuban species. These species are closely related according to morphology and were considered synonyms until 1981, when they were separated on the grounds of external characters of the body and the morphology of male genitalia. The present study seeks to analyze genetic polymorphism of T. flavida and T. bruneri populations using RAPD techniques, and to assess the genetic relationship between these species. Ten random primers were used to evaluate the genetic variability among species using RAPD-PCR. The genetic flow among them was calculated. The dendrogram based on calculated Jaccard distances showed two clearly distinguishable clusters which coincided with the studied species. Within each species, moderate genetic differentiation (Fst 0.05-0.15) and migration rates (N > 1) were found among populations, that reveal gene flow and genetic homogeneity. Between species, the Fst value showed a high genetic differentiation and the migration rate was insufficient to maintain genetic homogeneity, and confirmed the absence of gene flow between them. Our results confirm the genetic variability among T. flavida and T. bruneri species.

La subfamilia Triatominae (Hemiptera: Reduviidae) agrupa a los vectores principales y potenciales de la Enfermedad de Chagas, presente en México, Centroamérica y Sudamérica, Triatoma flavida y T. bruneri son especies autóctonas cubanas. Estas especies están muy relacionadas desde el punto de vista morfológico y por ello fueron consideradas sinonimas hasta el 1981, cuando fueron separadas teniendo en cuenta los caracteres externos del cuerpo y la morfología de la genitalia del macho. El presente trabajo pretende confirmar el polimorfismo genético entre las poblaciones selváticas de T. flavida y domiciliadas de T. bruneri utilizando la técnica de RAPD-PCR. Un total de 10 cebadores al azar fueron usados para evaluar la variabilidad genética entre las especies usando la técnica de RAPD-PCR, calculándose el flujo genético entre las especies. El dendrograma obtenido, basado en la distancia genética de Jaccard, mostró dos grupos que coinciden con las especies estudiadas. Dentro de cada especie estudiada se encontró una moderada diferenciación genética (Fst 0.05-015) y tasas de migración (N > 1) que revelan flujo genético y homogeneidad genética. Entre las especies estudiadas los valores de Fst muestran una alta diferenciación genética y tasas de migración insuficientes para mantener homogeneidad genética y confirman la ausencia de flujo genético entre ellas. Estos resultados confirman la variabilidad genética entre ambas especies.

Trichomonas vaginalis can be infected with double-stranded RNA (dsRNA) viruses designated T. vaginalis virus (TVV), which may have important implications for trichomonal virulence and disease pathogenesis. We tested for TVV in 40 fresh T. vaginalis isolates from Cuban patients by total extraction of nucleic acids (DNA and RNA). TVV was detected in 22 (55%) of the 40 T. vaginalis isolates. This gives an estimate of the infection rate of Cuban T. vaginalis isolates by the dsRNA virus. Future research should focus on the association between trichomonosis symptoms and the presence of TVV.

The applicability of 5 protocols useful for the extraction of genomic DNA of triatominae was evaluated and the modified potassium acetate method was described as a method with which a high yield and purity of DNA is obtained in the shortest time and at the lowest cost to be used as a mold in the random amplified polymorphic DNA technique (simple method to detect the DNA genetic polymorphism) and probably in other molecular techniqeus based in the PCR amplification. The DNA quality is a crucial element for this technique, which needs a DNA extraction method as standardized as possible to obtain a pure non degraded DNA free of RNA and of PCR inhibitors, because changes in the purity can affect the amplification profiles and this is manifested in the presence of false bands and in the little reproducibility of the assay.

Se evaluó la aplicabilidad de 5 protocolos útiles para la extracción del ADN genómico de Triatomíneos, y se describió el método del acetato de potasio modificado, como un método con el que se obtiene un alto rendimiento y pureza del ADN en el menor tiempo y costo, para su utilización como molde en la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPD [la cual es un método simple para detectar el polimorfismo genético del ADN]) y probablemente en otras técnicas moleculares basadas en la amplificación por la reacción en cadena de la polimerasa. La calidad del ADN constituye un elemento crucial para esta técnica, la cual necesita un método de extracción de ADN lo más estandarizado posible con el que se obtenga un ADN puro, no degradado, libre de ARN y de inhibidores de la reacción en cadena de la polimerasa: porque cambios en la pureza afectan los perfiles de amplificación y esto se manifiesta en la presencia de bandas falsas y en la poca reproducibilidad del ensayo.

DNA from 10 individuals from 5 populations of Rivulus collected in the western region of Cuba was amplified at random. No monomorphic marker resulted from the amplification by using 5 primers, which showed the high genetic variability existing among the fishes of the 5 populations. According to the genetic distance among the individuals, they were divided into 4 groups, for which there are specific genetic markers of RAPD, since they are not observed in the rest of the subjects. These results support the use of RAPD as an efficient tool for the genetic characterization of Cuban fishes of the Rivulus genus.

Se amplificó al azar el ADN de 10 individuos de 5 poblaciones de Rivulus colectados en la región occidental de Cuba. De la amplificación, empleando 5 cebadores, no resultó ningún marcador monomórfico, lo que evidenció una alta variabilidad genética entre los peces de las 5 poblaciones. Según la distancia genética entre los individuos, se forman 4 grupos, para cada uno de los cuales aparecen marcadores genéticos de RAPD (ADN polimórfico amplificado al azar) que son específicos, porque no se evidencian en el resto de los individuos. Estos resultados apoyan la utilización del RAPD como una herramienta eficiente para la caracterización genética de peces cubanos del género Rivulus.

A neutral activity of Boophilus microplus in the intestine was identified by electrophoresis in polyacrilamide gel copolymerized with gelatin. The maximum of activity was attained at pH 6.0. The highest specific activity at that pH was obtained with casein substrate. The disappearance of this activity was observed in both substrates after the addition of phenylmethylsulphonyl fluoride in the reaction mixtures. It was very interesting to find out an endopeptidase activity with these characteristics in the intestine, in spite of the fact that the digestive activity in ticks is intracellular at very acid pH, which does not occur in other insects.

Se realizó la identificación de una actividad neutra en intestino de Boophilus microplus por electroforesis en geles de poliacrilamida copolimerizados con gelatina, y el máximo de actividad se obtuvo a pH 6,0. Con el sustrato caseína, se obtuvo la mayor actividad específica a ese pH. La desaparición de esta actividad fue demostrada para ambos sustratos después de la adición de fluoruro de fenil metil sulfonilo en las mezclas de reacción. Resulta muy interesante encontrar una actividad endopeptidasa con estas características en el intestino, a pesar de que la actividad digestiva en garrapatas es intracelular a pH muy ácido, a diferencia de los insectos.

In the present paper it was determined the concentration of immunoglobulin G in extracts from gut of female Boophilus microplus engorded during the first 7 days of the second stage of continual digestion by using the simple radial immunodiffusion technique. It was also measured the concentration of hemoglobin by spectrophotometric methods. The analysis of correlation between both variables made during the study was positive and significant for p < 0.05. The analysis of simple variance and the application of Duncan's test resulted in a marked reduction of the concentrations of hemoglobin in the gut from the 5th day of study, which is connected with the beginning of the active process of oviposition, and in an important decrease of the concentration of immunoglobulin from the 7th day of the study. Though there is a trend to diminish in the concentrations of both blood proteins, the proteolysis of the IgG by gut extracts could not be produced in vitro.

En el presente trabajo se determinó la concentración de inmunoglobulina G en extractos de intestino de hembras de Boophilus microplus repletas durante los 7 primeros días de la segunda fase de digestión continua, mediante la técnica de inmunodifusión radial simple. Se midió también la concentración de hemoglobina por métodos espectrofotométricos. El análisis de correlación entre ambas variables durante el estudio fue positivo y significativo para p < 0 ,05. El análisis de varianza simple y la aplicación de la prueba de Duncan resultaron en una disminución significativa de las concentraciones de hemoglobina en el intestino a partir del 5to. día de estudio, lo cual se relaciona con el comienzo del proceso activo de oviposición; así como una reducción significativa de la concentración de inmunoglobulina a partir del 7mo. día de estudio. Aunque se evidencia la tendencia a la disminución de la concentración de ambas proteínas sanguíneas, no se pudo producir in vitro la proteólisis de la IgG por extractos de intestino.